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分子生物学

RNAzol(总RNA提取试剂)

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货号:10429-1, 包装:100ML,价格:298元
货号:10429-2, 包装:大包装,价格:询价

10429
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QQ:1932526095
Email: proandybio@163.com

产品名称:RNAzol(总RNA提取试剂)
英文名称:RNAzol Reagent
储存条件:2-8°C

RNAzol(Trizol).jpg


RNAzol(总RNA提取试剂)

产品简介

        本品RNAzol可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取 Total RNA。样品在 RNAzol 中能够充分被裂解,在加入氯仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层(鲜红色下层,含有蛋白质、 多糖、脂肪酸、细胞碎片和少量 DNA),RNA 分布在上清层中,收集上清层,注意不要收集中间层,经 异丙醇沉淀便可以回收得到 Total RNA。使用 RNAzolTotal RNA 的提取过程可在 1 小时内完成。 提取的 Total RNA 纯度高,很少含蛋白质及基因组 DNA,可以直接用于 Northern 杂交、mRNA 纯化、 体外翻译、RT-PCR等各种分子生物学实验。如果用于 RT-PCR 实验,即使有少量的基因组 DNA 也会影响实验结果,因此,实验前应使用 DNase I (RNase-free)进行处理。

RNA提取实验前的准备

1--氯仿(CHCl3),异丙醇,75%乙醇(RNase-free),DNase/RNase-Free去离子水。

2--尽量使用一次性塑料器皿。使用高温高压灭菌后的离心管或用于微量移液器的枪头。若使用玻璃器皿等,应进行160干热灭菌2h。不能进行干热灭菌的器皿,需用0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37下处理12h,然后在高温高压灭菌以除去残留的DEPCRNA实验用的器具建议专门使用,不要用于其他实验。

3--使用的无菌水须用0.1%DEPC处理后再进行高温高压灭菌。如果使用的试剂不能高温高压灭菌,请使用高压灭菌后的仪器盛装,无菌过滤后使用。

4--请使用一次性塑料手套和口罩进行所有试剂配置和实验操作,以避免RNase的污染。

实验操作

样品量

RNAzol使用mL

10cm2的贴壁培养细胞

1-2

5x106-1x107的非贴壁培养细胞

1

100µL的白细胞

2

50-100mg的组织样品(易提取RNA

1

50-100mg的组织样品(不易提取RNA,如肝,脾,骨及软骨等)

2

15-30mg的植物材料(多糖和多酚含量不高的)

1

2-5x107的酵母细胞

1

1--实验样品的研磨和匀浆

A,贴壁培养细胞---a,倒出培养液,用1xPBS清洗1次。

                           b,每10cm2生长的培养细胞中加入1-2mLRNAzol,轻微晃动,确保使裂解液均匀分布于细胞表面。注意:对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮刀玻璃细胞。

                           c,将内含细胞的裂解液转移至离心管中,用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。

                           d,室温(15-30)静置5min,然后从核蛋白中分离RNA.

B,悬浮培养细胞---a,将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中,8,000×g 4离心 2 分钟,弃上清,注意不要破 坏细胞沉淀。

                b,向每 5×106 个细胞中加入 1 mL RNAzol

                c,用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。

                d,室温(15-30)静置 5 分钟,然后从核蛋白中分离 RNA

C,动物组织,植物材料样品

     a,将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,期间不断加入液氮,直至研磨成粉末状(如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量),可以向研钵中加入与样品匀浆量匹配的适量的RNAzol 。对于新鲜的组织样品,立即加入RNAzol,充分匀浆。

     b,将匀浆液转移至离心管中,室温(15-30)静置5min

     c12000×g 4离心5min

     d,小心吸取上清液,移入新的离心管中(切勿吸取沉淀)。

2-Total RNA的提取

            a,向上述步骤1的匀浆裂解液中加入氯仿(RNAzol1/5体积量),盖紧离心管盖,混合至溶液乳化呈乳白色。

            b,室温静置5min

            c12000×g 4离心15min,从离心机中小心取出离心管,此时匀浆液分为三层,即:无色的上清液(含RNA,中间的白色蛋白层(大部分是DNA,下层是带有颜色的有机相。

            d,吸取上清液转移至另一新的离心管中,切勿吸出白色中间层。

            e,向上清中加入0.5-1RNAzol体积的异丙醇,上下颠倒离心管充分混匀后,室温下静置10min

            f12000×g 4离心10min,一般在离心后,试管底部会出现RNA沉淀。

3-RNA沉淀的清洗

小心弃去上清,切勿触及沉淀,残留少量异丙醇没有关系,加入与RNAzol等量的75%乙醇,轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁,7500×g 4离心5min后小心弃去上清,切勿触及沉淀。

4-RNA的溶解

打开离心管盖,室温干燥沉淀几分钟,沉淀干燥后,加入适量的DNase/RNase-Free去离子水溶解沉淀。注意:不可以离心或加热干燥,否则RNA将会很难溶解。

RNA纯度分析

1. 用琼脂糖凝胶电泳(1%琼脂糖+溴乙锭)分析按以上方法提取获得的 1-2 μg 热变性 total RNA。对于没有降解的 RNA 可能是 2 种 核糖体 RNA(真核细胞:28S 18S),条带亮度约为 2:1。但如果核糖体 RNA 条带弥散,可能 RNA 已降解。此外,如果条带大小超过 28S,可能存在基因组 DNA 污染,建议使用 DNase I 处 理。

2. 吸光度分析:用 TE Buffer 稀释 RNA 后测定吸光度,OD260/OD280 比值在 1.7-2.1 为好。 例:RNA 浓度计算方法: RNA 浓度(μg/μl=OD260-OD320×稀释倍数×0.04

保存温度4避光保存。