产品名称：大肠杆菌菌液直扩PCR鉴定试剂盒

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英文名称：Escherichia coli liquid direct PCR kit

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储存条件：-20°C

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应用:科研

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大肠杆菌菌液直接PCR试剂盒

【产品内容】

组分	规格
2×直扩PCR Mix	1 ml
RNase-Free ddH2O	1 ml

【储存条件】

该试剂盒置于-20℃条件下可保存12个月。

【产品概述】

本产品为2×浓度的快速扩增PCR预混液，具有极高的扩增速度与稳定性。反应缓冲液针对菌落/菌液PCR优化，适合大肠杆菌来源的模板，是PCR鉴定实验的理想选择。本产品包含合适浓度的Mg²⁺、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。产品中包含上样缓冲液，扩增产物无需额外添加Loading Buffer即可直接点样电泳。

【使用方法】

一、PCR 反应体系

组分	推荐用量	推荐终浓度
2×直扩PCR Mix	10 μl	1×
Forward Primer(10μM)	0.5 μl	0.2-0.4 μM
Reverse Primer (10μM)	0.5 μl	0.2-0.4 μM
模板DNA	1 μl
ddH2O	补足至20 μl

注：各组分使用前应充分混匀。

a.引物终浓度：推荐每条引物使用终浓度为0.4 μM，引物使用量太多会导致非特异性扩增增加，使用量过少则会导致扩增失败或产量低。

b.模板使用量

菌液：建议取用量为1 μl菌液为模板

菌落：可直接挑取单菌落于反应液中，或将菌落溶解于10-20 μl无菌水中，混匀吸取1 μl为模板

c.反应体系：推荐使用20 μl，也可根据使用习惯调整体系体积大小。

d.体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

二、PCR 反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1 cycle
变性	98℃	15 sec	35 cycles
退火	56℃	15 sec
延伸	72℃	15 sec/Kb
终延伸	72℃	5 min	1 cycle

*退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值2-5 ℃，或通过梯度PCR确定最佳温度。

【琼脂糖凝胶电泳】

PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳（无需加入Loading Buffer）。

【对照反应】

在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

【注意事项】

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。

2. 本产品仅作科研用途！