货号：10433-1， 包装：1000U，价格：140元
货号：10433-2， 包装：10000U，价格：1100元
英文名称：Taq DNA Polymerase（有外切酶酶活性）
Taq DNA聚合酶
Taq DNA Polymerase
产品描述 :
Taq DNA Polymerase 是嗜热性 Thermus aquaticus 表达的热稳定重组型 DNA 聚合酶，分子量为 94 KD。具有 5’→3’ 聚合酶活性和 5’→3’外切酶活性，有 3’→5’外切酶活性。扩增产物具有 3’-dA，可直接用于 TA 克隆。
产品组分：
组分 | 1000U |
10×Taq Buffer (Mg 2+ Free) | 4X1ML |
25 mM MgCl2 | 2X1ML |
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 200ul |
产品应用：基因型鉴定，菌落PCR等常规PCR.
活性定义：用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，74℃，30 min 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个 活性单位（U）。
质量控制：
核酸外切酶残留检测：10 U 本品和 0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育 4 h，DNA 的电泳谱带无变化。
切口酶残留检测：10 U 本品和 0.5 μg IL23R 质粒，37℃下孵育 4 h，DNA 的电泳谱带无变化。
RNase 残留检测：10 U 本品和 0.5 μg 293T 细胞总 RNA，37℃下孵育 1 h，RNA 的电泳谱带无变化。
温度保存：-20℃保存，有效期2年。
PCR 反应体系（冰上配制）：
组分 体积 （ul） 终浓度 |
ddH2O to 50 - |
10×Taq Buffer (Mg 2+ Free) 5 1× |
25 mM MgCl2 3 1.5 mM |
dNTP Mix (10 mM each) 1 0.2 mM |
模板 DNA optional - |
引物 1(10 μM) 2 0.4 μM |
引物 2(10 μM) 2 0.4 μM |
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) 0.4 0.04 U/μL |
【注】:1）Mg 2+ 终浓度：Mg 2+最佳浓度为 1.5-2 mM，如有需要，可 0.2-0.5 mM 为间隔向上摸索 Mg 2+最佳使用浓度。
2）聚合酶添加：室温下聚合酶有一定程度的 5’-3’聚合酶活性，为了防止非特异性扩增，建议将聚合酶在最后一步 加到反应体系中。
3）聚合酶浓度：推荐使用 0.04 U/μL。可以在 0.025-0.04 U/ μL 之间进行优化。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL 反应体系）：
模板种类 | 扩增片段 |
基因组 DNA | 50 ng-100 ng |
质粒 DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL（不超过反应体系的 1/10） |
PCR扩增程序：
循环步骤 | 温度（ºC） | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94 | 30 sec-5 min | 1 |
变性 | 94 | 30 sec |
35 |
退火 | 50-60 | 30 sec | |
延伸 | 72 | 60 sec/kb | |
终延伸 | 72 | 10 min | 1 |
【注】: 1）预变性温度和时间：推荐使用 94℃。预变性推荐时间：质粒 DNA 等简单模板为 30 sec；cDNA、基因组 DNA 等复杂模板为 3 min；高 GC 含量模板为 5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐使用 60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设 置为 20 sec，可以在 10-30 sec 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）扩增产物：请将 PCR 扩增产物放置于-20℃保存，防止 DNA 发生降解。