产品名称：鼠尾直接PCR试剂盒(（快速基因型鉴定)

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英文名称：Mouse Direct PCR Kit

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储存条件：-20°C

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应用:科研

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鼠尾直接PCR试剂

（快速基因型鉴定)

【产品概述】

本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定而研制，能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA，无需抽提与纯化，可直接将消化产物作为模板进行PCR扩增。

【产品组分】

组分	100 rxns （20ul/rxn）	保存条件
鼠尾裂解液	10 ml	常温
2x 直扩PCRMix	1 mL	-20℃

【使用方法】

1.       消化裂解：取1-2mm左右的鼠尾置于离心管中，每管待鉴定的组织样本中加入70ul 鼠尾裂解液，98℃孵育30分钟。

2.       离心：12000 rpm，1min。

3.       基因鉴定：取0.5-1ul上清液用于PCR反应基因鉴定（适用于20ul反应体系，其他反应体系按比例增加上清液使用量）。

【PCR 反应鉴定】

一、PCR 反应体系

组分	推荐用量	推荐终浓度
2x 直扩PCR Mix	10ul	1X
Forward Primer(10uM)	0.5ul	0.2-0.4uM
Reverse Primer (10uM)	0.5ul	0.2-0.4uM
裂解产物（DNA模板）	1ul
ddH2O	补足至20ul

注：各组分使用前应充分混匀。

1.       模板使用量：建议按1-10%总体系量取用模板，20ul体系建议采用1ul上清液作为模板。

2.       引物终浓度：0.2-0.4uM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5uM范围内调整引物浓度。

3.       反应体系：推荐使用20ul，也可根据使用习惯调整体系体积大小。

4.       体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

二、PCR 反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3min	1 cycle
变性	98℃	15sec	35 cycles
退火	56℃	15sec
延伸	72℃	15sec/Kb
终延伸	72℃	5min	1 cycle

*退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值2-5℃，或通过梯度PCR确定最佳温度。

【琼脂糖凝胶电泳】

PCR产物可直接点样跑琼脂糖凝胶（不需加 Loading Buffer）。

【对照反应】

在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

【注意事项】

1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。

3. 本产品仅作科研用途！