产品名称：TCA蛋白浓缩试剂盒

---

英文名称：TCA Protein Precipitation Kit

---

储存条件：RT

---

应用:科研

---

TCA蛋白浓缩试剂盒

TCA Protein Precipitation Kit

产品组分(50T)；

产品名称	规格	保存温度
试剂A--沉淀剂	10ml	RT
试剂B--洗涤液	30ml	RT
试剂C--助沉淀剂	5ml	RT
试剂D--中和液	250ul	RT
1M  NaCI	1ml	RT
5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）	1ML	-20℃
40mM 碳酸钠	1ml	RT

产品简介：

试剂盒原理：在酸性条件下，三氯醋酸（Trichloroacetic acid，TCA）与蛋白质形成不溶性盐，使蛋白质变性导致构象发生改变，蛋白暴露出较多的疏水性基团，蛋白发生聚集而沉淀。为了避免TCA对后续电泳的影响，沉淀的蛋白要使用洗涤液彻底清洗去除TCA。浓缩后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白样品处理。

操作方法：

1---准备1.5ml干净的离心管，加入800ul蛋白样品溶液。

可选：如果样品溶液中离子强度低于10mM,补加8ul的1M NaCI溶液。若低于800ul的样品，加入8ul 1M NaCI,用水补齐体积至800ul，使NaCI终浓度为10mM.

2---加入80ul试剂C-助沉淀剂，混匀，常温静置15min。

3---加入步骤2溶液1/8体积的试剂A -110 μl，补加1/8体积水110ul，涡旋震荡10-30秒，使之充分混匀。

4--冰浴放置15min。

5--4℃，12000 rpm（13000 g）离心10 分钟。 注：离心后白色蛋白沉淀弥散性可见于离心管管壁上。

6--小心去掉上清液，保留沉淀。

注：请小心操作，可以用移液器辅助彻底吸弃上清。

7--沉淀中加入600 μl试剂B，涡旋震荡10-30秒，彻底混匀。

注：试剂B有刺激性气味，请在通风橱内操作。

8--冰浴15min。

9--4℃，12000 rpm（13000 g) 离心10分钟；在通风橱中，倒掉上清。残留上清用10 μl吸头彻底吸弃，沉淀物通风晾干30-60秒。注：沉淀不能过分干燥，否则将导致蛋白不好溶解。

10--蛋白溶解：

根据下表选择溶解缓冲液

下游实验	溶解缓冲液
SDS-PAGE电泳	1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）。 注：加入溶解缓冲液后，彻底溶解沉淀（37℃温浴处理），溶液正常颜色应为蓝色；如果溶液为淡绿色或黄色，加入1/10体积中和液D，使颜色变回蓝色。 95℃ 处理5分钟，电泳上样
BCA蛋白定量	40mM 碳酸钠pH11.25
等电聚焦IEF/2D电泳	7M尿素，2M硫脲，40mM Tris，1%C7B2O或1% ASB-14 pH10.4
酶切实验	100 mM碳酸氢铵 pH8.5

保存温度：

试剂盒常温运输；收到后，按照标签温度贮存；本试剂盒有效期1年